Untersuchungen zur Zytotoxizität von Extrakten und Inhaltsstoffen der Kavawurzel (Piper methysticum
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Beschreibung
Ziel der Arbeit war eine "bioassay-orientierte Fraktionierung" von Inhaltsstoffen der Kavawurzel. Als Testsystem wurde der Brine-Shrimp-Assay mit Artemia salina als Testorganismus eingesetzt, der ein schnelles Screening auf Zytotoxizität erlaubt. Verschiedene Kavawurzelextrakte wurden hergestellt und miteinander verglichen. Der acetonische Extrakt (bei Raumtemperatur extrahiert) wurde an Sephadex LH-20 vorfraktioniert. Es wurden sechs Fraktionen erhalten, die mittels HPLC-DAD und LC-ESI-MS charakterisiert wurden, um die Haupt- und Nebenkomponenten zu identifizieren. Im Brine-Shrimp-Assay zeigten die Fraktionen folgende zytotoxische Wirkungen: Fraktion 1 Fraktion 4 Fraktion 5 Fraktion 6. Fraktion 6 wirkte, wie Fraktion 1, nicht zytotoxisch. Im nächsten Schritt wurden die aktivsten Fraktionen 2, 3 und 4 ausgewählt und mittels High-Speed Countercurrent Chromatography (HSCCC) getrennt. Die erhaltenen HSCCC-Fraktionen wurden im Brine-Shrimp-Assay, sowie mit HPLC-DAD und LC-ESI-MS untersucht. Dadurch wurde ein Bezug zwischen auftretender Zytotoxizität und der Zusammensetzung der Fraktionen hergestellt. Die ersten HSCCC-Fraktionen waren jeweils inaktiv oder nur sehr gering zytotoxisch. Sie enthielten polare Verbindungen, die nicht weiter untersucht wurden und Minorkavalactone. Bei den letzten HSCCC-Fraktionen, welche die restlichen Hauptkavalactone enthielten, war ein deutlicher Aktivitätsanstieg zu verzeichnen. Die Aktivitäten der HSCCC-Fraktionen der Sephadex-Fraktionen 2 und 3 waren in etwa vergleichbar, die der Sephadex-Fraktion 4 deutlich geringer. Die Hauptkomponenten der aktiven Fraktionen wurden isoliert und die Reinverbindungen separat im Brine-Shrimp-Assay untersucht. Kavain, Methysticin, 7,8-Dihydromethysticin und Yangonin waren nicht zytotoxisch. 5,6,7,8-Tetrahydroyangonin wirkte sehr gering zytotoxisch, Demethoxyyangonin mittelmäßig und 7,8-Dihydrokavain zeigte eine höhere Zytotoxizität als der Standard Podophyllotoxin
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